Сертификати

Резюме на изследването за Лактубацилус Булгарикус GLB44

Бактериите са най-често срещаната форма на живот на планетата Земя. Бактериите, намиращи се в/или върху нашето тяло са десет пъти повече от клетките които изграждат съставят човешкото тяло, и играят важната роля в това да ни поддържат здрави. Тези „добри“ бактерии ни осигуряват хранителни вещества, възпрепятстват растежа на патогенни или „лоши“ бактерии в тялото ни, и спомагат нормалното развитие на имунната ни система. Много от тези „добри“ бактерии принадлежат към групата на така наречените лактобацили. Храната която ядем, водата която пием и дори въздухът който дишаме съдържат бактерии които допълват „добрите“ бактерии, живеещи в/върху нашето тяло. Повечето хора са запознати само с бактериите които причиняват инфекции, докато бактериите подпомагащи здравето ни остават по-малко познати за широката общественост. Доказано е, че определени „добри“ бактерии са способни да подтиснат растежа на други, по-вредни бактерии. Многобройни научни изследвания се занимават с тези помагащи, или още пробиотични бактерии. Пробиотичните бактерии са включени в много от храните които ядем, като например киселото мляко. Целта е да се допълват с бактериите в тялото ни и така да ни осигурят по-добро здраве. Агенцията по храните и лекарствата изисква определени щамове „добра“ бактерия, каквато е Лактобацилус Булгарикус, задължително да бъдат налични във ферментирали млечни продукти за да могат те да бъдат наречени „кисело мляко“.

По данни на последни научни изследвания пробиотичната активност е специфична при различните щамове бактерии, които често са част от групата наречена „Лактобацилус“. В нашата лаборатория, ние оценихме инхибиторните ефекти на един пробиотичен щам, Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 използвайки органичен сок. Обикновено продуктите съдържат различни видове бактерии необходими за ферментацията, и някои от които могат да са вредни за човека. Ние тествахме дали добавянето на този щам пробиотична бактерия би довело до инхибирането или до убиването на потенциални патогени. По време на тези изследвания добавихме пробиотичния щам , Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 към сокове съдържащи специфични „лоши “бактерии включително и тези които най-често се асоциират със заболявания причинени от храни, като например листерия, ешерихия коли, салмонела и шигела които могат да бъдат открити в неправилно приготвена или почистена храна. Резултатите показаха, че Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 е способен да намали растежа на потенциално вредни бактерии причиняващи заболявания при човека. В повечето случаи, резултатите показват, че намаляването на броя „лоши“ бактерии е над от 99%.

Широкият диапазон на действие на Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 е необичайно сред видовете „Лактобацилус“, което предполага, че съществуват специфични клетъчни компоненти които могат да обяснят това действие. Способността на един организъм да инхибира растежа на друг организъм е в резултат на протеинови субстанции наречени бактериоцини. Такива съединения са обичайни в природата но обикновено са насочвани към конкретни щамове на други бактерии които се конкурират за хранителните вещества с пробиотичните бактерии в естествена среда каквато е стомашно чревния-тракт. Поради тази причина е необичайно да се намери единичен щам Лактобацилус , който да произвежда инхибиторен ефект за широк спектър от вредни бактерии, предвид, че тези бактерии  рядко биха могли да бъдат открити по едно и също време в една и съща естествена среда. Ние продължаваме да оценяваме инхибиторните свойства на този щам, както и да тестваме положителния ефект от добавянето на Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 в различни хранителни продукти. Предвид, че този подвид на Лактобацилус булгарикус е бил използван безвредно в храни в продължение на повече от 100 години без да има индикации за предозиране или странични ефекти, ние вярваме, че ако бъде добавен към непастьоризиран сок, би могъл да служи както като натурален консервант, то така и би бил способен да инхибира „лошите“ бактерии и по този начин да увеличи полезните и здравословни бактерии в нашето тяло.

С уважение, Андрю Ондердонк
Тест за инхибиране на патогени

Цел:

Да се докаже, дали Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 инхибира растежа на Листерия Моноцитогенес в морковен сок.

Тестови материали:
1. Лиофилизирана бактерия Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (живи бактерии в прахообразна форма – 1 х 109/г., предоставени от К. Петков) 2. Морковен сок (българско прозиводство предоставен на 06/05/14г. от К. Петков) 3. Плаки с трипсинов соев агар с 5% овча кръв 4. Листерия Моноцитогенес – ATCC BAA – 751 5. Листерия Моноцитогенес – BWH 432

Бактериален инокулат

Листерия Моноцитогенес ATC BAA – 751 За тези експерименти са използвани предварително приготвени, замразени клетъчни култури Листерия Моноцитогенес BAA – 751. Бактериалната концентрация е 9.9 х 108/ml. За контрола и тестовите проби Листерия Моноцитогенес BAA – 751: Замразената тръба съдържаща Листерия Моноцитогенес BAA – 751 е извадена от фризера и е оставена за размразяване на стайна температура. Бактериите биват разредени (1:10000) в стерилен фосфат, буфериран физиологичен разтвор с цел да се постигне концентрация от приблизително 9.9х104/ml. 5ul от разредения материал е добавен към 5ml от всеки от тестовите проби за да се постигне концентрация от приблизително 1х102/ml.

Листерия Моноцитогенес – BWH 432 За тези експерименти са използвани предварително приготвени, замразени клетъчни култури Листерия Моноцитогенес – BWH 432. Бактериалната концентрация е 1.68х109/ml. За контрола и тестовите проби Листерия Моноцитогенес – BWH 432: Замразената тръба съдържаща Листерия Моноцитогенес – BWH 432 е извадена от фризера и е оставена за размразяване на стайна температура. Бактериите биват разредени (1:100000) в стерилен фосфат, буфериран физиологичен разтвор с цел да се постигне концентрация от приблизително 1.68х104/ml. 30ul от разредения материал е добавен към 5ml от всеки от тестовите проби за да се постигне концентрация от приблизително 1х102/ml.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44

1 грам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 е добавен към 9ml. стерилна вода на стайна температура. Разтворът е смесен чрез разбъркване в продължение на 5 минути за да сe осигури хомогенността на сместа. 0.05ml или 0.5ml от приготвения разтвор са добавени към 5 ml от пробата.

Тестова процедура:

С уважение, Андрю Ондердонк

Тест за инхибиране на патогени

Цел:

Да се докаже, дали Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 инхибира растежа на Ешерихия Коли в зеленчуков сок.

Тестови материали:

1. Лиофилизирана бактерия Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (живи бактерии в прахообразна форма – 1х 109/g) 2. Зеленчуков сок (3 бутилки сок “Juice Press Organic Complete Source, 17 течни унция всяка) 3. Плаки с трипсинов соев агар 4. Ешерихия Коли – ATCC 25922

Бактериален инокулат

Ешерихия Коли За тези експерименти са използвани предварително приготвени, замразени клетъчни култури Ешерихия Коли. Бактериалната концентрация е 1.32 х 109/mL.

За контрола и тестовите проби Ешерихия Коли: Замразената тръба съдържаща Ешерихия Коли е извадена от фризера и е оставена за размразяване на стайна температура. Бактериите биват разредени (1 : 10000) в стерилен фосфат-буфериран физиологичен разтвор с цел да се постигне концентрация от приблизително 1 х 105/mL. 50ul от разредения материал е добавен към всяка от тестовите проби за да се постигне концентрация от приблизително 1 х 102/mL. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 2 грама Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 е добавен към 18 mL стерилна вода на стайна температура. Разтворът е смесен чрез разбъркване в продължение на 5 минути, за да се осигури хомогенността на сместа. Към всяка една от тестовите проби са добавени 0.5 mL от приготвения разтвор.

Тестова процедура:

Следните тестови проби са приготвени за Ешерихия Коли.

Контролни проби: 5 бутилки, всяка съдържаща 50 mL зеленчуков сок

Тестови проби: 5 бутилки, всяка съдържаща 50 mL сварен зеленчуков сок, плюс Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus. Към контролните и тестовите проби, описани по-горе, е добавена Ешерихия Коли. Всички проби са поставени в хладилник (4оС) за 24 часа. След охлаждането, бактериалната концентрация при всяка от пробите е потвърдена. Извършени са 10 разреждания в стерилен фосфат-буфериран физиологичен разтвор. 0.1mL кратно за всяко разреждане.

table 1

С уважение, Андрю Ондердонк
Тест за инхибиране на патогени

Цел:

Да се докаже, дали Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 инхибира растежа на различни концентрации (1 x 105/ml, 1 x 103/ml) Салмонела Тифимуриум в морковен сок.

Тестови материали: 1. Лиофилизирана бактерия Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 ( CFU на прах 1 х 109/g, получени на 06/05/14 от К. Петков) 2. Морковен сок 3. Плаки с трипсинов соев агар (TSA) 4. Салмонела Тифимуриум – клинично изолирана

Бактериален инокулат

Салмонела Тифомуриум

За тези експерименти са използвани предварително приготвени, замразени клетъчни култури Салмонела Тифимуриум. Бактериалната концентрация е 5.5 x 108/ml. За контрола и тестовите проби Салмонела Тифимуриум 1 х 105/ml: Замразената тръба съдържаща Салмонела Тифимуриум е извадена от фризера и е оставена на размразяване на стайна температура. Бактериите биват разредени (1:10) в стерилен фосфат- буфериран физиологичен разтвор с цел да се постигне концентрация от приблизително 5.5 х 107/ml. 9ul от разредения материал е добавен към 5ml от всеки от тестовите проби за да се постигне концентрация от приблизително 1 х 105/ml.

За контрола и тестовите проби Салмонела Тифимуриум 1 х 103/ml:

Замразената тръба съдържаща Салмонела Тифимуриум е извадена от фризера и е оставена за размразяване на стайна температура. Бактериите биват разредени (1:1000) в стерилен фосфат- буфериран физиологичен разтвор с цел да се постигне концентрация от приблизително 5.5 х 105/ml. 9ul от разредения материал е добавен към 5ml от всеки от тестовите проби за да се постигне концентрация от приблизително 1 х 102/ml.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 1 грам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 е добавен към 9ml стерилна вода на стайна температура. Разтворът е смесен чрез разбъркване в продължение на 5 минути, за да се осигури хомогенността на сместа. 0.05 ml или 0.5ml от приготвения разтвор са добавени към 5ml от пробата.

Тестова процедура:

Следните проби са подготвени за Салмонела Тифимуриум във всяка концентрация от контролни проби. 3 тръби, всяка съдържаща 5ml морковен сок. Тестови проби: 3 тръби, всяка съдържаща 5ml морковен сок плюс 0.05ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 3 тръби, всяка съдържаща 5ml морковен сок плюс 0.5ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Салмонела Тифимуриум е добавена към контролните и тестовите проби описани по-горе. Всички проби са съхранявани в хладилник (4°С) в продължение на 24 часа. След охлаждането, бактериалната концентрация е установена за всяка една от пробите. 10 кратни разреждания са извършени в стерилен фосфат-буфериран физиологичен разтвор. 0.1 мл от всяко разреждане беше посято върху TSA Агарните плаки са инкубирани при 37°С в продължение на 24 часа преди да бъдат преброени; всички количества са протоколирани като CFU/ml. Всички манипулирани, тестови проби са поставени след това на температура 37°С за 48 часа. След инкубацията, бактериалната концентрация е установена както е описано по-горе.

Резултати: table

С уважение, Андрю Ондердонк
ACTA MICROBIOLOGICA BULGARIA

Писмо до редактора

Клинични опити с Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 при пациенти с Хеликобактер Пилори

Пациенти: Борислав Владимиров, Яна Валериева, Иван Терзиев, Кирил Петков Департамент по гастроентерология, Университетска Болница „Царица Йоанна – ИСУЛ“, София, Департамент по Патология, Университетска Болница „Царица Йоанна- ИСУЛ“, София ПроВиотик АД , Братя Бъкстон 58, София, България

Въведение:

Целта на това изследване е да се докаже ефекта на Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB- 44 при пациенти заразени с Хеликобактер Пилори.

Методи:

Наблюдението включва 24 пациента на средна възраст от 45,46 ± 13,4 години, 50% от които са жени. Всички пациенти са Хеликобаткер Пилори позитивни. Инфекцията е установена чрез бърз уреазен тест (RUT), фекален антиген тест, тест на дъха, и хистологично изследване или чрез комбинация от всички изброени. Терапията в миналото е била неефикасна при шестима от пациентите, а останалите не са били третирани преди. Извършена е езофагогастродуоденоскопия на всички пациенти със следните резултати: 26.1% са диагностицирани с гастроезофагиален рефлукс, 65.2% - хиатална херния, 87% - стомашни промени, 4.3%- eрозии на дванадесетопръстника, и 21.4% - aктивна язва на дванадесетопръстника. Проведеният курс от администрацията на Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (капсули и таблетки), с дневна доза от 15х09 в комбинация с рабепразол 2 х 20 мг. или пантопразол 2 х 20 мг. в продължение на седем дни, следвани от Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 в продължение на три дни в същата дозировка (15 х 109). При всички пациенти е извършен контролен фекален антиген тест за Хеликобактер Пилори, 43 дни след лечението.

Резултати:

При 22 пациенти (91.7%) контролният фекален тест е негативен за наличието на Хеликобактер Пилори. При двама от пациентите (8.3%) контролното изследване показва наличие на Хеликобактер Пилори. И двамата пациенти принадлежат към групата на предварително третираните пациенти, които не са имали положителен ефект след приемането на различни антимикробни препарати. Останалите четирима пациенти принадлежащи към групата на предварително третираните пациенти (единият от които с автоимунен гастрид) са дали негативна проба за Хеликобактер Пилори. Пациентите не са споменали за странични ефекти по времето на прием на Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (ПроВиотик®). Този предварителен тест върху хора показва, нов и ефективен метод за третиране на пациенти с Хеликобактер Пилори, без прием на антибиотични препарати.

Заключение:

Предварителният тест върху хора демонстрира нов и ефективен метод за третиране на пациенти с Хеликобактер Пилори без прием на антибиотични препарати.
ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 ОБЕЩАВАЩИ РЕЗУЛТАТИ ПРИ ИНФЕКЦИИ С ХЕЛИКОБАКТЕР ПИЛОРИ

Яна Валериева, Борислав Владимиров, Иван Терзиев, Людмила Боянова

Резюме: Да се определи ефектът от ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 в готова терапевтична форма при инфекции, причинени от хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) в комбинация с инхибитор на протонната помпа.

Материали и методи:

Петдесет и двама пациенти (57,7% жени) със средна възраст от 43,52  13,4 г. бяха включени в изследването след проведена гастроентероскопия. Всички пациенти бяха диагностицирани като положителни на хеликобактер пилори чрез бърз уретарен тест, фекален антигенен тест, хистологична находка или в комбинация от тези методи. Десет пациенти (19,2%) са били лекувани в миналото от язвена болест в някаква степен. На всеки пациент бяха дадени ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 (капсули и таблетки) в дневна доза от 10 х 109 живи бактерии заедно с инхибитор на протонната помпа (рабепразол, пантопразол, езомепразол или омепразол) 20 мг/ ден за 7 дни, последвани от 3 дни самостоятелно ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 (капсули и таблетки) в същата доза. Всички пациенти бяха тествани отново за хеликобактер пилори след най-малко 43 дни.

Резултати:

След прилагането на ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 92,3% от всички положителни на хеликобактер пулори (ХБ) пациенти дадоха негативен контролен тест за ХБ (р0,001). Четирима пациенти останаха положителни на ХБ като един от тях в миналото си е лекуван неуспешно с антимикробни препарати.

Заключение:

ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 е ин-витро активен срещу хеликобактер пилори1. При пероралноприложение с адекватна доза ЛАКТОБАЦИЛУС БУЛГАРИКУС GLB44 в комбинация с инхибитор на протонната помпа е обещаващ метод за лечение при пациенти, положителни на хеликобактер пилори.

1. Боянова Л.; Стефанова – Кондратенко, М.; Митов, И. (май 2009). „Активност на щамове на лактобацилус булгарикус към хеликобактер пилори: първичен доклад“. Съобщения в „Приложна микробиология“ 48 (5): 579-84.
Противогъбична активност и ензимен профил на

LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 Росица Тропчева1, Яна Евстатиева1, Диляна Николова1, Светлана Съева-Кондратенко2, Петко Петков3, Кирил Петков3 1Департамент за биотехнологии, Факултет по Биология, Софийски Университет Св.Климент Охридски, 8, бул. Драган Цанков, 1164, София, България. 2Лаборатории Генезис ООД, София, България 2ПроВиотик ООД, София България. E-mail: tropcheva12@mail.com

Въведение:

Плесените и дрождите са главните развалящи микроорганизми, отговорни за значителни икономически загуби и няколко здравни рискове в човешката хранителна верига. Антимикробната дейност е важен критерии за избора на био-защитена млечно киселинна бактерия (LAB). Съществуват малко данни за противогъбичната дейност на българската млечно кисела бакетрия, както и нейната ензимна активност. С тази цел, се изследва действието на комерсиално достъпния пробиотик ПроВиотик®, съдържащ щама LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44, срещу дрожди и деториоративни и токсикогенни плесени, както и наличието на ключови ензими.

Материали и методи:

LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 (собственост на Лаборатории Генезис ООД) е тестван за противогъбична активност срещу пет вида плесен – Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium graminearum, Trichoderma viride, и Penicillium claviforme, както и три вида дрожди – Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces marxianus и Rdodoturuilla sp. , използвайки агарна дифузия. Ензимният профил на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 е установен с помощта на API ZYM – миниатюрен тест (BioMerieux, Франция), следвайки инструкциите на производителя. API- лентичката е „заразена“с GLB44- култура престояла 24 часа, отгледана в MRS бульон и след това инкубиран при температура от 37°С за 4 часа. Оценката на действието е представено в скала от 5 скали, в зависимост от наситеността на оцветяване.

Резултати:

Ензимен профил на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 Фигура 1. API ZYM ензимен профил на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44. Оценката на действието е представено в скала от 5 скали, в зависимост от наситеността на оцветяване.

Фигура2. Изображение на API ZYM миниатюрен тест (BioMerieux, Франция) на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44.

LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 притежава висока висока амино-пептидоза, киселинна фосфатаза и бета-галактосидазна ензиматична дейност и пълна липса на активност свързана с бета-глюкоронидаза на дебелото черво.

Противогъбично действие на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44

Фигура3. Противогъбична активност на L. Bulgaricus GLB44, определена на базата на инхибирането на финалния растеж на плесените след инкубация при температура от 29 °С в продължение на 5- 11 дни. Резултатите са представени като процент на инхибиране. Ин Витро тестовете разкриват широк спектър от противогъбично действие. LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 напълно потиска (100%) растежа на Aspergillus flavus, Fusarium graminearym, Trichoderma viride, Penicillium claviforme.

По отношение на Aspergillus Niger, се наблюдава по-ниска инхибиторна активност (66,6%). Фигура4. Ин Витро противогъбична дейност на LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 (анализ на единичен слой върху агарна плака).

Фигура5. Инхибиторно действие срещу дрожди (Контрол-Фунгосатин, 1000 000 U/ml) ПроВиотик® демонстрира по-силна инхибиция срещу Saccharomyces cerevisiae, в сравнение с комерсиално използвания антибиотик Fungosatin. LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 не инхибира млечната киселина Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus, която е перспектива за бъдещо приложение на GLB44 в млечната индустрия.

Заключение:

Демонстрираното силно протеолитично действие на ПроВиотик® прави LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 интересен за исползване при продукцията на антихипертензивни и имуно мудолиращи продукти както и при производството на различни млечни продукти. Противогъбичното действие на ПроВиотик® е едно обещаващо предимство, ако се предполага, че потенциалното му приложение в различни хранителни технологии е като био консервиращо средство в здравословни продукти срещу гъбични инфекции.

ProViotic Genesis Laboratories Organic Certificate.pdf

Harvard Medical School Summary Report.pdf

L. bulgaricus - Harvard Medical School.pdf

H pylori - in vitro inhibition.pdf

BIO Certificate

BIO Certificate 2